Поверхностное окрашивание: Одним из факторов, ограничивающих разрешение электронного микроскопа, является толщина среза. Как указывалось в гл. 1, рассеивание электронов толстым срезом может вызывать значительную хроматическую аберрацию, которая ограничивает разрешение. Отрицательно сказывается на разрешении также наложение проекций структур друг па друга в таких срезах.

Если на разных уровнях среза лежат близко расположенные тельца диаметром 50 А, то при толщине среза более чем 50 А их проекции будут накладываться друг на друга. Поскольку глубина фокуса электронного микроскопа во много раз больше толщины среза, все такие тельца окажутся в фокусе одновременно, что даст в результате не поддающуюся расшифровке. Кослетт несколько лет назад вычислил, что разрешение, получаемое на срезах, составляет примерно одну десятую толщины среза.

Практически редко удается изготовить срезы тоньше 100-200 А, и срезы, получаемые в большей части лабораторий, бывают, как правило, от серебристо-серых до бледно-золотистых, что соответствует толщине 500- 900 А. Таким образом, для исследований с высоким разрешением обычно рекомендуется использовать "поверхностное окрашивание".

Теоретически считается, что если сетку с ультратонкими срезами не погружать в каплю красителя, а положить ее на каплю срезами вниз, то окрашиваться будет только одна сторона среза. Полагают, что краситель не проходит в глубь среза, поскольку окрашивание только одной стороны дает в результате меньший контраст, чем окрашивание среза путем погружения. Конечно, когда в качестве фиксатора применяется осмий, материал но всей толщине среза будет иметь определенную степень контрастности.

Тем не менее если поверхность среза после окрашивания будет достаточно контрастна, то материал, лежащий в более глубоких отделах, окажется по сравнению с ней настолько светлым, что его доля в общей плотности изображения будет ничтожна. Сообщалось, что после заливки в эпон, используя метод поверхностного окрашивания цитратом свинца по Рейнольдсу, на срезах толщиной 500 А было получено разрешение 10 А.

Однако оказалось, что успех поверхностного окрашивания зависит от многих непостоянных факторов. Шалла и др. показали, что если срезы ткани, залитой в аралдит или мараглас (эпоксидная смола), не высушить после резки, то в тех местах, где компоненты ткани пересекают поверхность среза, происходит проникновение перманганата стронция. Однако они сообщали, что этот краситель не проникал через чистую эпоксидную смолу и не достигал полностью замкнутых в ней структур.